Molecular survey of Leishmania spp. in skin samples of capybaras (Hydrochoerus hydrochaeris) from different areas of Brazil / Investigação molecular de Leishmania spp. em amostras de pele de capivaras (Hydrochoerus hydrochaeris) de diferentes regiões do Brasil

Leishmaniases comprise a spectrum of diseases caused by protozoan parasites of the genus Leishmania, with some species of rodents being incriminated as reservoirs. The capybara is the largest extant rodent species in the world and is widely distributed in South America. The occurrence of infection by Leishmania spp. was investigated in capybaras captured in Brazil during 2015­2019 from established populations in five highly anthropic areas of the state of São Paulo and two natural areas of the states of Mato Grosso and Mato Grosso do Sul. A total of 186 individuals were captured and subjected to abdominal skin biopsy. All skin samples were Leishmania kDNA-negative, suggesting that capybaras have no role in the transmission cycles of Leishmania species in the studied areas despite the well-known role of other rodents in the life cycle of Leishmania spp.(AU)

As leishmanioses compreendem um espectro de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania e algumas espécies de roedores são incriminadas como reservatórios de Leishmania spp. As capivaras compreendem a maior espécie de roedores existentes e são amplamente distribuídas na América do Sul. Para investigar a ocorrência de infecção por Leishmania spp. em capivaras, durante os anos de 2015-2019 capivaras foram capturadas em cinco áreas antrópicas do estado de São Paulo e em duas áreas naturais dos estados do Mato Grosso e do Mato Grosso do Sul, todos esses ambientes com populações de capivaras estabelecidas. Um total de 186 indivíduos foram capturados e submetidos à biópsia de pele abdominal. Todas as amostras de pele foram negativas para o alvo kDNA, assim, os dados sugerem que nas áreas estudadas as capivaras não têm papel no ciclo de transmissão de espécies de Leishmania spp., apesar do papel bem conhecido de outros roedores no ciclo de vida de Leishmania spp.(AU)

Phase II validation study of the rK39 ELISA prototype for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis in Brazil / Estudo de validação da fase II do teste ELISA rK39 para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina no Brasil / Estudio de validación de la fase II del test ELISA rK39 para el diagnóstico de la leishmaniasis visceral canina en Brasil

Abstract: Dogs are the main reservoirs in the domestic transmission cycle of visceral leishmaniasis, and the diagnosis is essential for the effectiveness of the control measures recommended by the Brazilian Ministry of Health. We assessed the diagnostic performance of the ELISA-Vetlisa/BIOCLIN prototype with serum samples from 200 dogs, in triplicate, including symptomatic, oligosymptomatic, asymptomatic, and healthy dogs, originated by two distinct panels (A and B) characterized by parasitological tests as the reference standard. In this study, the prototype kit showed a 99% sensitivity (95%CI: 94.5-100.0) and a 100% specificity (95%CI: 96.4-100.0). The sensitivity of the prototype kit did not vary significantly with the clinical status of the dogs. Considering the final result classification (positive or negative), agreement between the results of repeated tests was almost perfect (kappa = 0.99; 95%CI: 0.98-1.00). ELISA-Vetlisa/BIOCLIN is a promising option for the serological diagnosis of canine visceral leishmaniasis in Brazil.

Resumo: Os cães são os principais reservatórios do ciclo de transmissão domiciliar da leishmaniose visceral, e o diagnóstico é essencial para a efetividade das medidas de controle recomendadas pelo Ministério da Saúde. Os autores avaliam o desempenho diagnóstico do protótipo da ELISA-Vetlisa/BIOCLIN em amostras sorológicas de 200 cães, em triplicata, incluindo cães sintomáticos, oligossintomáticos e saudáveis, com dois painéis distintos (A e B) caracterizados por testes parasitológicos enquanto referência. No estudo, o kit-protótipo mostrou sensibilidade de 99% (IC95%: 94,5-100,0) e especificidade de 100% (IC95%: 96,4-100,0). A sensibilidade do kit-protótipo não variou de maneira significativa de acordo com o estado clínico dos cães. Considerando a classificação final dos resultados (positivo ou negativo), a concordância entre os resultados dos testes em triplicata foi quase perfeita (kappa = 0,99; IC95%: 0,98-1,00). O protótipo ELISA-Vetlisa/BIOCLIN tem o potencial de ser utilizada para o diagnóstico sorológico da leishmaniose visceral canina no Brasil.

Resumen: Los perros son los principales reservorios en el ciclo de transmisión doméstica de la leishmaniasis visceral, por ello el diagnóstico es esencial para la efectividad de las medidas de control recomendadas por el Ministerio de Salud de Brasil. Evaluamos el desempeño diagnóstico de ELISA-Vetlisa/BIOCLIN prototipo con muestras de sérum de 200 perros, en triplicado, incluyendo sintomático, oligosintomático, asintomático y perros sanos, originadas por dos paneles distintos (A y B), caracterizados por test parasitológicos como referencia estándar. En este estudio, el kit prototipo mostró un 99% de sensibilidad (IC95%: 94,5-100,0) y un 100% de especificidad (IC95%: 96,4-100,0). La sensibilidad del kit prototipo no varió significativamente con el estatus clínico de los perros. Considerando la clasificación final del resultado (positiva o negativa), el acuerdo entre los resultados de los tests repetidos fue casi perfecto (kappa = 0,99; IC95%: 0,98-1,00). ELISA-Vetlisa/BIOCLIN tiene potencial para ser usado para el diagnóstico serológico de la leishmaniasis visceral canina en Brasil.

Serological, molecular, and microscopic detection of Leishmania in cats (Felis catus) in Belo Horizonte, Minas Gerais State, Brazil / Detecção sorológica, molecular e microscópica de Leishmania em gatos (Felis catus) em Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil

Abstract The role of cats in the epidemiological cycle of leishmaniasis remains unclear. To better understand the occurrence of leishmaniasis in cats, we studied the frequency of Leishmania in serum samples of 100 cats living in an endemic region for canine and human leishmaniasis by serological, parasitological, and molecular methods. Of the 100 cats, 54 were seropositive for Leishmania antibodies by immunofluorescence antibody test. None of the bone marrow aspirates collected from these cats tested positive for the parasite in culture or upon polymerase chain reaction (PCR) analysis. Biopsy samples of the ears also tested negative for Leishmania upon PCR analysis. These findings may indicate that the region is endemic for canine leishmaniasis and cats are infected by Leishmania; or that cross-reaction with antibodies against other parasites increases the frequency of seropositivity; or that cats respond to Leishmania infection by producing antibodies when few or no parasites are present in bone marrow and tissue samples. Overall, our results suggest that cats can be infected by Leishmania ; however, we failed to demonstrate feline parasitosis. These findings highlight the need to study leishmaniasis in cats, since sandflies feed on cats, these animals may act as a reservoir for the parasite.

Resumo O papel dos gatos no ciclo epidemiológico da leishmaniose ainda não está claro. Para entender melhor a ocorrência de leishmaniose em gatos, estudou-se a frequência de Leishmania em amostras de soro de 100 gatos, os quais vivem em uma região endêmica para leishmaniose canina e humana, por métodos sorológicos, parasitológicos e moleculares. Dos 100 gatos, 54 foram soropositivos para anticorpos de Leishmania por teste de anticorpos de imunofluorescência. Nenhum dos aspirados de medula óssea coletados desses gatos mostrou-se positivo para o parasita em cultura, ou após a realização da reação em cadeia da polimerase (PCR). Amostras de biópsia das orelhas também foram negativas para Leishmania submetidas a PCR. Esses achados indicam que na região estudada endêmica para leishmaniose canina, os gatos podem se infectar por Leishmania; ou que a reação cruzada com anticorpos contra outros parasitas aumenta a frequência de soropositividade; ou que os gatos respondem à infecção por Leishmania produzindo anticorpos quando poucos ou nenhum parasita estão presentes na medula óssea e em amostras de tecido. Em geral, os resultados sugerem que os gatos podem ser estar infectados por Leishmania spp. No entanto, não foi possível demonstrar parasitismo felino. Essas descobertas evidenciam a necessidade de estudar a leishmaniose em gatos, uma vez que, como os flebotomíneos se alimentam em gatos, e esses animais podem atuar como um reservatório para o parasita.

Leishmania, Babesia and Ehrlichia in urban pet dogs: co-infection or cross-reaction in serological methods?

INTRODUCTION: The present study was designed to assess the occurrence of co-infection or cross-reaction in the serological techniques used for detecting the anti-Leishmania spp., -Babesia canis vogeli and -Ehrlichia canis antibodies in urban dogs from an area endemic to these parasites. METHODS: The serum samples from dogs were tested for the Babesia canis vogeli strain Belo Horizonte antigen and Ehrlichia canis strain São Paulo by immunofluorescence antibody test (IFAT) and by anti-Leishmania immunoglobulin G (IgG) antibody detection to assess Leishmania infection. We used the following four commercial kits for canine visceral leishmaniasis: ELISA, IFAT, Dual Path Platform (DPP) (Bio Manguinhos(r)/FIOCRUZ/MS) and a rK39 RDT (Kalazar Detect Canine Rapid Test; Inbios). RESULTS : Of 96 serum samples submitted to serological assays, 4 (4.2%) were positive for Leishmania as determined by ELISA; 12 (12.5%), by IFAT; 14 (14.6%) by rK39 RDT; and 20 (20.8%), by DPP. Antibodies against Ehrlichia and Babesia were detected in 23/96 (23.9%) and 30/96 (31.2%) samples, respectively. No significant association was identified between the results of tests for detecting Babesia or Ehrlichia and those for detecting Leishmania (p-value>0.05). CONCLUSIONS: In the present study, we demonstrated co-infection with Ehrlichia or Babesia and Leishmania in dogs from Minas Gerais (Brazil); we also found that the serological tests that were used did not cross-react. .

Epidemiological aspects of human and canine visceral leishmaniasis in Montes Claros, State of Minas Gerais, Brazil, between 2007 and 2009 / Aspectos epidemiológicos da leishmaniose visceral humana e canina em Montes Claros, Estado de Minas Gerais, Brasil, entre 2007 e 2009

INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis (VL) is an expanding zoonosis in Brazil and is becoming urbanized in several Brazilian regions. This study aims to describe the epidemiological features of human and canine VL in the municipality of Montes Claros, State of Minas Gerais, by focusing on their spatial distribution. METHODS: Data concerning human cases and reactive dogs for VL from 2007 to 2009 were obtained from the Information System for Disease Notification (SINAN) and from reports of the local Centro de Controle de Zoonoses (CCZ), respectively. The addresses of human and canine cases have been georeferenced and localized in thematic maps, allowing their spatial visualization as well as the identification of areas at risk of VL transmission. RESULTS: Ninety-five cases of human VL were reported in the period. The 0-9-year-old age group (48.4 percent) was the most affected, within which the majority consisted of male patients (64 percent). Of the samples collected for the canine serological survey, 2,919 (6.3 percent) were reactive to VL. The spatial localization of these cases shows that the disease was scattered in the urban area of the municipality. Areas showing a higher dissemination risk were concentrated in the central, northwestern, and southern regions of the city. CONCLUSIONS: Identifying the areas most at risk in urban Montes Claros may help guide actions toward local epidemiological vigilance and control.

INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose em expansão no Brasil e está se tornando urbana em várias regiões brasileiras. Este estudo descreve aspectos epidemiológicos da LV humana e canina no município de Montes Claros, Minas Gerais, com enfoque na distribuição espacial de sua incidência. MÉTODOS: É um estudo epidemiológico descritivo, que utiliza dados relativos à casos humanos e soro-positividade canina para LV, obtidos do Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN) e de relatórios do Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) local. Os endereços dos casos estudados foram georreferenciados e localizados em mapas temáticos que permitem sua visualização espacial, bem como a identificação de áreas de risco de transmissão da doença. RESULTADOS: A leishmaniose visceral humana e canina mostrou ampla distribuição espacial em Montes Claros. No período entre 2007 a 2009, foram notificados 95 casos humanos da doença. O grupo etário entre 0 e 9 anos foi o mais afetado (48.4 por cento) com maior prevalência no sexo masculino (64 por cento). Dentre as amostras caninas coletadas para investigação sorológica, 2.919 (6,3 por cento) foram reativas para LV. A localização espacial desses casos mostra que a doença está disseminada na área urbana do município. As áreas com maior risco de disseminação concentraram-se nas regiões central, noroeste e sul da cidade. CONCLUSÕES: A identificação das áreas de maior risco na zona urbana de Montes Claros poderá guiar as ações de vigilância epidemiológica e de controle locais.

Phlebotomine sandflies (Diptera: Psychodidae) in Governador Valadares, a transmission area for American tegumentary leishmaniasis in State of Minas Gerais, Brazil / Flebotomíneos (Diptera: Psychodidae) em Governador Valadares, área de transmissão de leishmaniose tegumentar americana no Estado de Minas Gerais, Brasil

INTRODUCTION: A study on the phlebotomine sandfly fauna was carried out in an endemic area for American tegumentary leishmaniasis in the municipality of Governador Valadares, in the State of Minas Gerais, Brazil. METHODS: Captures were undertaken using HP light traps in four districts, on three nights per month, for one year (from January to December 2008). Correlations between climatic factors (temperature, relative air humidity and rainfall) and the numbers of sandflies collected was observed. RESULTS: 5,413 phlebotomine specimens were caught and were identified as belonging to 12 species. Of these specimens, 2,851 (52 percent) were females and 2,562 (48 percent) were males. CONCLUSIONS: Lutzomyia intermedia predominated (29.9 percent of the species caught), thus suggesting that they were responsible for transmission of American tegumentary leishmaniasis, together with L. whitmani, which was also found in the area (4.3 percent). The presence of L. longipalpis (11.9 percent), the main vector for visceral leishmaniasis in Brazil, is an important finding, which makes rigorous entomological surveillance of the area necessary.

INTRODUÇÃO: Um estudo da fauna de flebotomíneos foi realizado em uma área endêmica para leishmaniose tegumentar americana no município de Governador Valadares, no Estado de Minas Gerais, Brasil. MÉTODOS: Capturas foram feitas com armadilhas luminosas HP em quatro bairros, três noites por mês, durante o período de janeiro a dezembro de 2008. A correlação entre fatores climáticos (temperatura, umidade relativa do ar e pluviosidade) e o número de flebotomíneos coletados foi avaliada. RESULTADOS: Foram capturados 5.413 espécimes de flebotomíneos, distribuídos em 12 espécies, sendo 2.851 (52 por cento) fêmeas e 2.562 (48 por cento) machos. CONCLUSÕES: Lutzomyia intermedia foi predominante com 29,9 por cento das espécies capturadas, sugerindo ser a responsável pela transmissão de LTA, juntamente com L. whitmani, que também foi encontrada na região (4,3 por cento). A presença de L. longipalpis (11,9 por cento), principal vetor de LV no Brasil, é um dado relevante tornando-se necessário uma rigorosa vigilância entomológica na região.

Participação de Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) e Ctenocephalides felis felis (Bouché, 1835) na epidemiologia da leishmaniose visceral canina / Participation of Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) and Ctenocephalides felis felis (Bouche, 1835) in the epidemiology of canine visceral leishmaniasis

Foi realizado um estudo caso-controle para avaliar possíveis associações entre as infestações por Rhipicephalus sanguineus, ou por Ctenocephalides felis felis, e a detecção de anticorpos anti – Leishmania em cães de uma área endêmica para leishmaniose visceral. Foi avaliado, também, a capacidade. vetorial de R. sanguineus na transmissão da leishmaniose visceral canina (LVC), utilizando condições controladas de laboratório. Para o estudo casocontrole, foi utilizada uma amostra de 200 cães soropositivos e 200 soronegativos provenientes de um inquérito sorológico censitário em 5556. cães, dos quais 7,8% (432) foram positivos na detecção de anticorpos anti – Leishmania pelos testes de ELISA e RIFI (Bio-Manguinhos). Os cães foram considerados infestados ou não por carrapato e pulga com base em inspeção direta para detecção dos ectoparasitas. Foi realizado o georreferenciamento. dos cães soropositivos e da presença dos ectoparasitos na área de estudo. O estudo em condições controladas para a detecção da infecção de R. sanguineus por Leishmania sp., assim como uma possível interação entre estas duas espécies, foi realizado utilizando a PCR, isolamento em cultura e esfregaço em lâminas coradas por Panótico-Laborclin. Os exames foram realizados em estádios do carrapato provenientes de infestação artificial em cães com LVC.

Os cães utilizados no experimento foram infectivos para Lutzomyia longipalpis pelo exame de xenodiagnóstico . Antes da realização dos. exames os estádios foram mantidos de 4 a 15 dias em condições controladas de laboratório. A prevalência de infestação por R. sanguineus nos cães soropositivos (38,5%) foi significativamente maior que nos cães soronegativos (29%) (p=0,04); para C. felis felis também houve diferença significativa nas prevalências de infestação (36,5% e 15,5%, respectivamente) (p<0,01). A chance de positividade para Leishmania sp. foi 53% mais alta nos cães infestados por carrapato (Odds ratio [OR] = 1,53; intervalo de 95% de confiança [IC95%] = 1,01-2,33 ) e cerca de 3 vezes mais alta nos cães com infestação por pulga (OR = 3,13; IC95% = 1,94-5,06). Ambos os ectoparasitos estiveram amplamente distribuídos na área de estudo com uma tendência em acompanhar a distribuição dos cães soropositivos. A presença de anticorpos anti – Leishmania mostrou – se associada tanto à infestação por R. sanguineus. quanto por C. felis felis. No estudo controlado, foram positivos pela PCR 10 “pools” de estádios do carrapato, incluindo estádios de ecdises sem alimentar. Nos esfregaços não foram observadas formas parasitológicas sugestivas de Leishmania spp., embora pode – se observar a presença de uma estrutura. flagelada em um estádio de larva ingurgitada sugestivo de um tripanosomatídeo. Na cultura em meio NNN/LIT de todos os estádios analisados não foi observado o crescimento de Leishmania spp. Potenciais. explicações para estes resultados recaem sobre a capacidade vetorial dessas espécies em transmitir Leishmania sp. para a população canina, porém mais estudos são necessários para rejeitar ou não essa hipótese.

Participação de Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) e Ctenocephalides felis felis (Bouché, 1835) na epidemiologia da leishmaniose visceral canina

Foi realizado um estudo caso-controle para avaliar possíveis associações entre as infestações por Rhipicephalus sanguineus, ou por Ctenocephalides felis felis, e a detecção de anticorpos anti – Leishmania em cães de uma área endêmica para leishmaniose visceral. Foi avaliado, também, a capacidade. vetorial de R. sanguineus na transmissão da leishmaniose visceral canina (LVC), utilizando condições controladas de laboratório. Para o estudo casocontrole, foi utilizada uma amostra de 200 cães soropositivos e 200 soronegativos provenientes de um inquérito sorológico censitário em 5556. cães, dos quais 7,8% (432) foram positivos na detecção de anticorpos anti – Leishmania pelos testes de ELISA e RIFI (Bio-Manguinhos). Os cães foram considerados infestados ou não por carrapato e pulga com base em inspeção direta para detecção dos ectoparasitas. Foi realizado o georreferenciamento. dos cães soropositivos e da presença dos ectoparasitos na área de estudo. O estudo em condições controladas para a detecção da infecção de R. sanguineus por Leishmania sp., assim como uma possível interação entre estas duas espécies, foi realizado utilizando a PCR, isolamento em cultura e esfregaço em lâminas coradas por Panótico-Laborclin. Os exames foram realizados em estádios do carrapato provenientes de infestação artificial em cães com LVC.

Os cães utilizados no experimento foram infectivos para Lutzomyia longipalpis pelo exame de xenodiagnóstico . Antes da realização dos. exames os estádios foram mantidos de 4 a 15 dias em condições controladas de laboratório. A prevalência de infestação por R. sanguineus nos cães soropositivos (38,5%) foi significativamente maior que nos cães soronegativos (29%) (p=0,04); para C. felis felis também houve diferença significativa nas prevalências de infestação (36,5% e 15,5%, respectivamente) (p<0,01). A chance de positividade para Leishmania sp. foi 53% mais alta nos cães infestados por carrapato (Odds ratio [OR] = 1,53; intervalo de 95% de confiança [IC95%] = 1,01-2,33 ) e cerca de 3 vezes mais alta nos cães com infestação por pulga (OR = 3,13; IC95% = 1,94-5,06). Ambos os ectoparasitos estiveram amplamente distribuídos na área de estudo com uma tendência em acompanhar a distribuição dos cães soropositivos. A presença de anticorpos anti – Leishmania mostrou – se associada tanto à infestação por R. sanguineus. quanto por C. felis felis. No estudo controlado, foram positivos pela PCR 10 “pools” de estádios do carrapato, incluindo estádios de ecdises sem alimentar. Nos esfregaços não foram observadas formas parasitológicas sugestivas de Leishmania spp., embora pode – se observar a presença de uma estrutura. flagelada em um estádio de larva ingurgitada sugestivo de um tripanosomatídeo. Na cultura em meio NNN/LIT de todos os estádios analisados não foi observado o crescimento de Leishmania spp. Potenciais. explicações para estes resultados recaem sobre a capacidade vetorial dessas espécies em transmitir Leishmania sp. para a população canina, porém mais estudos são necessários para rejeitar ou não essa hipótese.

Lack of parthenogenesis by Amblyomma cajennense (Acari: Ixodidae)

Some reproductive parameters of adult stages of Amblyomma cajennense ticks were studied. The capacity of virgin females to reproduce by parthenogenesis was evaluated, during an experimental infestation, in absence of males, on a horse (Equus cabalus). Ticks were spread either completely free or in limited sites on the body of the animal. The engorged virgin females showed longer feeding periods and lighter body weights than those that had been fertilized. Some of these unmated females produced smaller egg masses, which had no embryonary development. On the other hand, females that had been inseminated produced larger egg masses, with normal embryonary development that led to viable larvae. Under the studied conditions, A. cajennense females did not reproduce by parthenogenesis